Restrictasas
1.- ¿Qué son las restrictasas o enzimas de restricción?
2.- ¿Cómo se descubrieron las enzimas de restricción?
3.- ¿Cómo se pueden separar los fragmentos de restricción?
4.- Consulte su libro de texto o alguna dirección de internet (por ejemplo, “rebase.neb.com”) y escriba el nombre de las bacterias utilizadas para obtener las siguientes restrictasas: a) EcoRI, b) BsuRI, c) HaeIII.
5.- ¿Qué significado tienen las tres primeras letras del nombre de una enzima de restricción (por ejemplo, TaqI)?
6.- Si el punto de corte de EcoRI está señalado en una cadena de ADN por la marca (^), indíquelo en la cadena complementaria de esta secuencia de reconocimiento: 5’- G^A A T T C - 3’.
7.- ¿Qué entiende por extremos adherentes o cohesivos? ¿Son importantes?
8.- Previa búsqueda en internet, indique la secuencia de reconocimiento y el punto de corte (^) de las siguientes restrictasas: a) BamHI, b) HindIII, c) TaqI.
9.- Sabiendo que la enzima de restricción EcoRV reconoce la secuencia 5’-GATATC- 3’ y que después de la hidrólisis libera extremos romos, indique los puntos de corte (^) en ambas cadenas.
10.- ¿Qué son mapas de restricción?
11.- Se tiene un ADN de 8 kb que presenta un único sitio o diana de restricción para EspI. ¿Cuántos fragmentos de restricción resultarían al ser tratado con ella?
12.- ¿Por qué las enzimas de restricción de una bacteria no cortan el ADN de la propia célula bacteriana?
13.- Cuando en una experiencia de ingeniería genética se introduce en la bacteria ADN recombinante, siendo por tanto extraño para la célula, ¿será destruido por las propias enzimas de restricción?
14.- ¿Qué es la ingeniería genética y cuáles son las “herramientas” o técnicas imprescindibles?
15.- ¿Qué son plásmidos?
16.- Si un plásmido convenientemente modificado se adiciona a un cultivo bacteriano, ¿cómo se podrá saber qué bacterias lo han incorporado?
17.- A y B son restrictasas. La acción de A sobre una molécula de ADN lineal de 10 kb genera dos fragmentos, de 4 kb y 6 kb. La acción de B da como resultado también dos trozos, de 1 kb y 9 kb. La acción conjunta de A y B sobre el ADN genera tres fragmentos de restricción, 4 kb, 1 kb y 5 kb. ¿Podría dar una explicación?
18.- Se tiene un ADN de 20 kb que presenta un solo sitio de restricción para la restrictasa A y otro para la B, localizados, respectivamente, a 6 kb y 2 kb del mismo extremo. Indique los fragmentos de restricción (FR) que resultan cuando el ADN es tratado con: A, B y ambas.